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HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量

   发布时间:2017-12-07   [点击量:385]  


脑心清片是由单味柿叶提取物(以下简称脑心清片浸膏)制成的中成药,经临床验证,对冠心病心绞痛、脑动脉硬化疗效显著,对短暂脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、心肌梗死后遗症等伴有或不伴有高血压、高血压等多种心脑血管疾病有良好的治疗效果,并具有一定的降血压、降血脂作用,长期服用未发现有明显毒副作用[1, 2]。脑心清片浸膏中的黄酮类活性成分的含量控制已有文献报道[3]。脑心清片浸膏中的另一个重要活性成分原儿茶酸[4],具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能[1,5],其质量控制是确保脑心清片高效安全的重要指标之一。本文以HPLC法测定脑心清片浸膏中主要活性成分原儿茶酸的含量,为脑心清片浸膏提供更全面的质量控制方法。

1    实验材料
          
  脑心清片浸膏(柿叶提取物,由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供);甲醇(色谱纯);原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检验所,批号:110809200503)。
     
  Agilent1100高效液相色谱仪,DADG1315B可见紫外检测器。

2    方法与结果

2.1    色谱条件与系统适用性
          
  色谱柱:依力特 C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈甲醇0.3%H3PO4,按表1进行梯度洗脱;检测波长:260 nm;流速:1 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。理论板数按原儿茶酸计算不低于2 500,拖尾因子1.03;对照品溶液主峰与供试品溶液中原儿茶酸峰保留时间的比值均应在0.  990;原儿茶酸与其他成分有效分离,分离度大于1.  97,见图1。

2.2    对照品溶液制备与线性关系考察
        
  精密称取原儿茶酸对照品适量,加甲醇溶解并定容,分别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61.  92、30.  96、15.48 μg/mL的溶液,按“2.1”项色谱条件分别进样10 μL各2次,测定峰面积,以峰面积(A)为纵坐标,对照品进样量(m)为横坐标,进行线性回归,得回归方程为
A=2508.6m+63.241,r=0.999 1

结果表明原儿茶酸进样量在0.154 8~2.  476 8 μg的范围内线性关系良好。

表1    梯度洗脱溶剂系统(略)

Table 1    Slovent system

A.原儿茶酸对照品;B.脑心清片浸膏

图1    脑心清片浸膏中原儿茶酸HPLC图谱(略)

Figure 1    The HPLC graph of protocatechuic acid in Naoxinqing

2.3    供试品溶液制备

精密称取脑心清片浸膏约20 mg,加甲醇20 mL使其完全溶解后,转入50 mL容量瓶,用甲醇定容,制成质量浓度约0.4 mg/mL 的溶液,0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。

2.4    稳定性试验

取原儿茶酸对照品(质量浓度为61.92 μg/mL)甲醇溶液,分别在0、1、2、4、6、8、12、24 h进样10 μL,测定其峰面积。结果原儿茶酸的平均峰面积为2 021.5,RSD值为1.36%。

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